脂蛋白SA2275抗体治疗金黄色葡萄球菌脑脓肿的实验初探

发布时间：2025-07-07 01:31

　　 目的探讨脂蛋白特异性抗体通过血脑屏障及其在抑制金黄色葡萄球菌脑脓肿形成中的作用。方法利用大肠埃希菌表达并纯化重组金葡菌脂蛋白SA2275,制备特异性小鼠多克隆抗体(anti-SA2275)。制作金葡菌感染脑脓肿模型,利用ELISA法检测经腹腔注射的anti-SA2275在小鼠脑组织中的滴度,评估抗体通过血脑屏障的能力;再利用梯度稀释细菌计数法检测脑脓肿中的细菌载量,对脑脓肿进行连续病理切片检测脑脓肿的大小,评价抗体anti-SA2275治疗金葡菌脑脓肿的效果。结果成功获得高纯度SA2275重组蛋白;免疫小鼠获得anti-SA2275,效价为1∶51 200;anti-SA2275注射金葡菌脑脓肿模型小鼠后,在动物脑组织中检测到抗体的存在;治疗组小鼠脑脓肿大小和菌载量显著低于阴性对照组。结论在金葡菌感染小鼠所致的脑脓肿形成过程中,脂蛋白SA2275特异性抗体可以通过血脑屏障分布至脑组织,显著抑制脑脓肿的形成及细菌的定植,具有治疗金葡菌脑脓肿的应用前景。

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【部分图文】：

图1 pET28a-sa2275表达质粒PCR鉴定

将含sa2275基因的PCR扩增片段与pET28a载体连接后转化大肠埃希菌BL21,从LBKana平板上挑取转化子,提取质粒并进行PCR扩增鉴定。结果如图1所示,琼脂糖凝胶电泳可见大小约800bp的目的条带,与预期sa2275(777bp)的大小相符。进一步质粒测序结果表明....

图2 SA2275重组蛋白诱导表达及纯化SDS-PAGE电泳图

培养工程菌pET28a-sa2275/BL21,用IPTG诱导表达3h,取样进行SDS-PAGE蛋白电泳分析。如图2A所示,以未诱导菌作对照,在约33×103处可见目的蛋白条带,与预期SA2275重组蛋白理论分子量相一致。收集工程菌,破碎后制备含重组蛋白上清,采用镍柱亲和层析法....

图3 HE染色观察金葡菌感染小鼠脑脓肿模型脑组织病理表现

图2SA2275重组蛋白诱导表达及纯化SDS-PAGE电泳图2.3金葡菌感染小鼠脑脓肿模型的建立

图4 ELISA法检测anti-SA2275抗体效价及金葡菌脑脓肿模型脑组织中anti-SA2275滴度计量分析

为验证抗体anti-SA2275对金葡菌脑脓肿形成的保护作用,本研究将小鼠anti-SA2275抗血清经腹腔注射给药,24h后接种金葡菌Newman株制作小鼠脑脓肿模型。5d后处死小鼠,取出脑组织。将脑脓肿组织制备匀浆,铺板进行细菌计数。结果如图5所示,anti-SA2275....

本文编号：4056279