BCCIP维持Lamin B1依赖的细胞核功能的研究

发布时间：2025-05-29 03:01

　　真核细胞的核膜由内、外两层脂质膜组成,将细胞核从胞浆内分隔出来,形成具有独立功能的细胞器。依附于核内膜下的网状核纤层结构由核纤层蛋白及其相互作用蛋白复合物组成,这些蛋白复合物进一步延伸,在细胞核内形成网状结构,称为细胞核骨架。核纤层与核骨架共同为细胞核提供结构支撑,并且在维持正常细胞核功能中发挥重要作用。BCCIP通过与BRCA2、p21等多种功能蛋白相互作用,在细胞有丝分裂、细胞周期调控、DNA同源重组修复、基因组稳定性等方面起着重要作用。本论文研究采用免疫共沉淀和GST融合蛋白沉降技术(GST-pulldown),鉴定了 BCCIP与核纤层蛋白Lamim B1之间的蛋白相互作用。研究中还创新性地构建了 BCCIP条件性表达实验系统,并利用该系统深入探索了 BCCIP蛋白的全新功能,即在维持细胞核正常功能过程中的作用。实验结果1.构建了两种BCCIP条件性表达实验系统。(1)构建了 BCCIP条件性敲低细胞系(HT-CKD)。该细胞系整合了 U6-LoxP-Neo-LoxP-shRNA 转基因表达盒(transgene expression cassette),表达 Cre 重组酶可以...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１真核细胞的核膜结构模式图??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ??

是遗传物质的复制、胆存、与转录遗传信息的主要场所。??从空间上将细胞核与细胞质区分开来的结构称为细胞核膜（ｎｕｃｌｅａｒ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ，?ＮＥ）。??如图１．１所示，在真核细胞中，细胞核膜由内、外两层平行的脂质膜鹏成，并在特定的??细胞周期将细胞核与细胞质分瞄开来，从而形成相....

图１．２?Ｌａｍｉｎ蛋白结构??

哺乳动物细胞中还包括微量的Ｌａｍｉｎ?Ａ－５１０口８］，Ｗ及干细胞特有的Ｌａｍｉｎ?Ｃ２口９］??及?Ｌａｍｉｎ?Ｂ?非０］。??如图１．２所示，Ｌａｍｉｎ具有共同的一级结构１＂心］，即Ｎ末端结构域（头部）、中间ａ螺??旋杆状域和Ｃ末端免疫球蛋白样折叠结构域（尾部，Ｉｇ－化ｅ化Ｉ....

图１．３?ＢＣＣＩＰ蛋白结构域示意图??

组中定位于１０ｑ２６．１［７２］。该基因的转录产物经选择性剪切作用产生两个异构体，并且进??一步翻译成ＢＣＣＩＰ?ａ和ＢＣＣＩＰ?Ｐ两个蛋白亚型。??ＢＣＣＩＰ蛋白包含Ｈ个主要结构域（图１．３），即Ｎ末端酸性结构域（Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌＡｃｉｄｉｃ??Ｄｏｍａｉｎ，?ＮＡＤ）、中....

图３．２?Ｃｒｅ介导的ＢＣＣＩＰ条件性敲低??

Ｕ６－ｐｌｏｘＰｎｅｏ－ＢＣＣＩＰ?ＳｈＲＮＡ转基因表达盒，Ｗ及Ｃｒｅ表达是否能够介导ＬｏｘＰ位点间??ＤＮＡ重组，有效切除新霉素抗性基因编码序列。??结果如图３．３所示，ｎｅｏ?（－）组均有细胞克隆形成，表明ＹＦＰ或Ｃｒｅ腺病毒感染后??有活细胞被接种至细胞培养皿中。在ＨＴ１０....

本文编号：4048621