阿尼昂尼昂热病毒样颗粒的构建和评价

发布时间：2025-06-26 01:59

　　 目的构建用于阿尼昂尼昂热核酸检测的病毒样颗粒质控品,并对其进行评价。方法体外合成MS2噬菌体和阿尼昂尼昂病毒相关基因,通过酶切连接的方式构建表达载体,IPTG诱导表达并经Co柱纯化获得病毒样颗粒,同基质混合后制成质控品,采用荧光RT-PCR方法对质控品的均匀性、运输稳定性、保存稳定性和冻融稳定性进行系统评价。结果成功构建pET-MS2-ONNV表达载体并获得了纯化的病毒样颗粒。制备的质控品无质粒DNA污染,均匀性测试时变异系数为1.25%,往返运输后Ct值变化不明显,可在4、-20、-70℃条件下保存至少30 d,并可经受8次反复冻融。结论本研究获得了均一、稳定、耐冻融的阿尼昂尼昂热核酸检测病毒样颗粒质控品,对阿尼昂尼昂热的防控具有重要意义,也为其它类似传染病病原体的质控品构建和评价提供了一个可行的方法。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要试剂
        1.1.2 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 表达载体构建
        1.2.2 病毒样颗粒的表达与纯化
        1.2.3 质控品的制备
        1.2.4 质控品的评价
            1.2.4.1均匀性
            1.2.4.2运输稳定性
            1.2.4.3保存稳定性
            1.2.4.4冻融稳定性
2结果
    2.1病毒样颗粒检测结果
    2.2 质控品的均匀性检测结果
    2.3 质控品的运输稳定性检测结果
    2.4 质控品的保存稳定性检测结果
    2.5 质控品的冻融稳定性检测结果
3讨论



本文编号：4052969