一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

发布时间：2025-07-03 04:28

　　 目的:探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法:荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法 (传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法)转染pCDHGFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48h后的转染效率明显升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48h后,TRAF6mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DN...

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 载体、细胞、主要试剂和仪器
    1.2 细胞培养
    1.3 质粒来源和转染效率的计算
    1.4 传统磷酸钙转染法转染293T细胞
    1.5 改良磷酸钙转染法转染293T细胞
    1.6 细胞转染效率的检测
    1.7 Real-time PCR法检测293T细胞中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA表达水平
    1.8 Western blotting法检测pCDH-GFP-3xflagTRAF6质粒转染后293T细胞中flag蛋白表达水平
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 荧光显微镜观察2种转染方法的转染效率
    2.2 Real-time PCR法检测pCDH-GFP-3xflagTRAF6质粒转染后293T细胞中TRAF6 mRNA表达水平
    2.3 Western blotting法检测pCDH-GFP-3xflagTRAF6质粒转染后293T细胞中flag蛋白表达水平
3 讨论



本文编号：4055770