噬菌体展示随机环八肽库的构建

发布时间：2025-07-08 23:29

　　目的构建表达于噬菌体表面的随机环八肽库。方法通过自行设计,人工合成编码随机环八肽的寡核苷酸片段,通过延伸引物扩增获得编码随机环八肽的基因片段。将编码基因片段和M13KE噬菌体载体经过EagⅠ和KpnⅠ限制性内切酶双酶切后进行连接,重组产物电转入大肠杆菌ER2738感受态细胞获得噬菌体展示随机环八肽库,噬斑及测序检测库容和多样性。结果构建的环八肽库库容超过7.5×109,重组阳性率为92.5%,不同率为97.3%。结论成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机环八肽库。

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【部分图文】：

图１肽库挑克隆测序部分结果

２μＬ收获的随机环八肽库，按１０倍比梯度稀释，分别取１０５～１０９倍比稀释物各１０μＬ加至４５℃水浴中保温的含顶层琼脂糖和ＥＲ２７３８的测试管中，混匀后分别铺于ＬＢ／ＩＰＴＧ／Ｘｇａｌ培养板，待顶层琼脂糖凝固后，３７℃倒置培养过夜。进行蓝斑计数，依据蓝斑数和稀释倍数计算库容量。２....