CircFAT1吸附miR-375从而增加骨肉瘤细胞中YAP1蛋白表达机制研究
【文章页数】:125 页
【学位级别】:博士
【部分图文】:
图1.1 circFAT1在骨肉瘤组织及细胞中表达显著增高
为了研究circFAT1在骨肉瘤发育中的功能,我们检测了circFAT1在12对软骨瘤和骨肉瘤组织以及骨肉瘤细胞系中的表达水平。通过使用逆转录聚合酶链反应(RT–PCR)和显色原位杂交(CISH),我们发现circFAT1在OS组织和细胞系中上调(图1.1)。3.2circFA....
图1.2 circFAT1在骨肉瘤细胞系中的特征
然后,我们通过Sanger测序证实了circFAT1RT-PCR产物从头到尾的剪接以及cir-cFAT1的大小(图1.2d)。但是,可以通过转拼或基因组重排产生头尾拼接。因此,我们排除了这些可能性。首先,我们设计了收敛引物来扩增FAT1mRNA,并设计了不同引物来扩增cir....
图1.3 circFAT1在骨肉瘤细胞系中的功能
为了探索circFAT1在OS细胞中的功能,我们将circFAT1小发夹RNA(shRNA)构建体转染到143B和HOS细胞中。该转染靶向circFAT1的连接位点,并建立了稳定的敲低细胞。在这些细胞中,circFAT1的表达显着降低(图1.3a)。相反,FAT1mRNA的表达....
图2.1 CircFAT1充当骨肉瘤细胞中miR-375的海绵。
由于circFAT1在细胞质中丰富且稳定,因此我们对在线AGO2免疫沉淀数据进行了分析,其中包括来自doRiNA的高通量测序。结果表明,在circFAT1区域中AGO2的占有率很高,在整个脊椎动物物种中高度保守(图2.1a)。为了验证这一结果,我们对HOS细胞中AGO2进行了RN....
本文编号:4059193
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