ERK1/2调节切应力、VEGF诱导内皮祖细胞PIM基因家族的表达

发布时间：2025-06-19 22:51

　　目的:探讨力学因素-流体切应力(fluid shear stress,FSS)和化学因素-血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中PIM激酶家族表达的影响及可能的信号机制。方法:(1)人脐血EPCs的分离、培养与鉴定:采用密度梯度离心联合差速贴壁法分离、培养人脐血EPCs;吞噬乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acetylated LDL,DilacLDL)与结合FITC标记的荆豆凝集素I(FITC-labeled europaeus agglutinin-I,FITCUEA-I)能力的实验进行细胞学鉴定。(2)VEGF对PIM激酶家族表达的检测:采用实时定量PCR技术检测VEGF刺激0.5 h、1 h、2 h、4 h及6 h时PIM激酶的表达水平。(3)切应力对PIM激酶家族表达的检测:利用平行平板流动腔系统对EPCs加载低(5 dyne/cm2)、中(15 dyne/cm2)及高(30 dyne/cm2)不同强度切应力,作用不同时间后(1 h、2 ...

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引言
第一部分 人脐血EPCs的培养及PIM在EPCs中表达的检测
    1.材料与方法
        1.1 实验细胞来源
        1.2 主要试剂及溶液的配制
        1.3 实验仪器
        1.4 人脐血EPCs的分离与培养
        1.5 Dil-acLDL、FITC-UEA-I免疫组化
        1.6 总RNA的提取及半定量PCR
    2.结果
        2.1 人脐血来源EPCs的鉴定
        2.2 EPCs中PIM激酶家族的表达
    3.讨论
第二部分 体外EPCs切应力加载模型的建立
    1.材料与方法
        1.1 EPCs细胞爬片的制备
        1.2 平行平板流动腔系统的建立
    2.结果
    3.讨论
第三部分VEGF对EPCs中PIM激酶表达的影响
    1.材料与方法
        1.1 主要试剂及溶液的配制
        1.2 实验仪器
        1.3 实验分组
        1.4 VEGF作用于EPCs
        1.5 抑制剂的处理
        1.6 实时定量PCR
        1.7 统计学分析
    2.结果
    3.讨论
第四部分 切应力对EPCs中PIM激酶家族及相关信号通路的影响
    1.材料与方法
        1.1 主要试剂及溶液的配制
        1.2 实验仪器
        1.3 实验分组
        1.4 抑制剂的处理
        1.5 实时定量PCR
        1.6 蛋白质免疫印及实验
        1.7 统计学分析
    2.结果
        2.1 不同切应力下对PIM激酶家族基因表达的影响
        2.2 切应力诱导PIM激酶表达上调相关的信号通路
        2.3 不同时间点下，5 dyne/cm2切应力对EPCs相关信号分子的影响
    3.讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
附录



本文编号：4051041