Ide基因通过AKT调控成肌细胞增殖和分化的研究

发布时间：2025-05-26 23:05

　　 旨在了解胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,Ide)在猪不同组织中的表达情况,及其在C2C12成肌细胞增殖和分化中的作用。本研究利用RT-PCR和Western blotting技术检测了Ide在8月龄雄性小型猪不同组织中的表达;利用siRNA技术干扰Ide表达,检测了Ide在C2C12成肌细胞增殖、凋亡和分化中的作用,试验分为Ide-siRNA处理组和NC-siRNA(negative control)对照组,每组3个重复。结果显示,Ide在猪的不同组织(包括大脑、股四头肌、股二头肌、背最长肌、心、肝、脾、肺、肾和睾丸)中广泛表达,其中,在股四头肌、肾和睾丸中表达量相对更高。Ide-siRNA转染成肌细胞48 h后,Ide表达量极显著下降(P<0.001)。CCK-8检测显示,干扰Ide表达促进了成肌细胞的增殖,细胞周期相关基因表达也显著升高,同时发现干扰Ide表达未引起成肌细胞凋亡。利用2%马血清诱导成肌细胞分化的同时转染Ide-siRNA以干扰其表达,在分化的第2和5天发现,与对照组相比,分化相关基因Myog、Myhc等在干扰组中的表达均显著下降...

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【部分图文】：

图1 Ide在小型猪不同组织中的表达

对小型猪大脑、股四头肌、股二头肌、背最长肌、心、肝、脾、肺、肾和睾丸10个组织中IdemRNA和蛋白表达情况进行检测,结果发现,IdemRNA在小型猪不同组织中均有表达(图1A),Westernblotting结果(图1B)显示,IDE蛋白在股四头肌、肾和睾丸中表达量高于其....

图2 Ide-siRNAs干扰效率检测

成肌细胞中转染Ide-si-1和NC-siRNA48h后检测成肌细胞相关基因Myod、Myog的表达变化,结果如图3所示,RT-qPCR检测mRNA相对表达量发现,降低Ide表达后(P<0.001),成肌细胞相关基因Myod(P<0.01)和Myog(P<0.05)的表达显著....

图3 干扰Ide 48h后成肌细胞相关基因表达

图2Ide-siRNAs干扰效率检测2.4干扰Ide表达促进成肌细胞增殖

图4 干扰Ide对成肌细胞增殖的影响

为了解Ide在成肌细胞分化中的作用,使用2%马血清诱导细胞成肌分化的同时转染Ide-si-1和NC-siRNA,计为第0天,在第3天再次转染,收集第2(D2)和5天(D5)细胞,检测分化相关基因的表达。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,Ide干扰组在分化第2天,随着Ide表达....

本文编号：4047116