PGE 2 在金黄色葡萄球菌毒力因子诱导奶牛子宫内膜组织炎症因子表达过程中的调控作用及其机制研究
发布时间：2025-05-27 04:23
子宫内膜炎可导致奶牛受孕延迟、不孕症和产奶量下降。细菌感染是奶牛子宫内膜炎的主要病因。临床上常使用抗生素治疗该病,但因子宫内膜的炎性损伤不能完全修复,影响奶牛的再孕率。由于对金黄色葡萄球菌感染引起奶牛子宫内膜炎的分子机制尚不完全清楚,制约了对该病的防治效果。研究表明,前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)参与多种炎症反应的过程,PGE2可通过调控具有血管再生作用的IL-8的表达,在人子宫内膜修复过程中发挥重要的作用。本试验通过对PGE2在金黄色葡萄球菌所致奶牛子宫内膜组织炎症反应中的作用及机制的研究,以阐明葡萄球菌性奶牛子宫内膜炎的分子机制。具体研究内容及结果如下:1.为建立体外培养奶牛子宫内膜组织在细菌性奶牛子宫内膜炎的研究方法,本试验分别使用不同浓度的热灭活金黄色葡萄球菌作用于体外培养的奶牛子宫内膜组织,通过qPCR检测受作奶牛子宫内膜组织中促炎性细胞因子IL-6、TNF-α mRNA表达量。结果显示:热灭活的金黄色葡萄球菌作用于体外培养的子宫内膜组织后,IL-6、TNF-αmRNA表达量均显著高于空白对照组(P<0.05)。这与细菌性奶牛子宫内膜炎发生时,...
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 奶牛子宫内膜炎
1.2 奶牛子宫内膜炎的分类
1.2.1 临床型奶牛子宫内膜炎
1.2.2 亚临床型奶牛子宫内膜炎
1.3 引起奶牛子宫内膜炎常见的细菌
1.4 金黄色葡萄球菌在奶牛子宫内膜炎中的研究现状
1.5 金黄色葡萄球菌致病机理
1.5.1 金黄色葡萄球菌的毒力因子
1.5.2 金黄色葡萄球菌的免疫逃避
1.5.3 金黄色葡萄球菌的耐药性
1.6 奶牛子宫对病原微生物的抵御机制
1.6.1 子宫内体液免疫反应
1.6.2 免疫细胞反应
1.6.3 释放细胞因子
1.7 调控免疫反应的细胞膜受体及其信号通路
1.7.1 Toll样受体
1.7.2 MAPKs细胞信号通路
1.7.3 NF-κB信号通路
1.7.4 TLR2、MAPK、NF-κB的相互关联
1.7.5 类固醇类激素调控子宫内免疫反应
1.8 PGE2的合成与降解过程及其在炎症反应中的作用
1.8.1 PGE2的合成与降解过程
1.8.2 PGE2及其受体对炎症反应的调控
1.9 致病菌引起的奶牛子宫内膜组织损伤及评价损伤的相关因子
1.9.1 致病菌感染引起的组织损伤
1.9.2 评价损伤的相关因子
1.10 本研究的目的及意义
2 研究一 金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织中促炎性细胞因子表达的影响
2.1 试验材料与主要仪器设备
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验设备及主要仪器
2.1.3 试验所用试剂
2.2 试验方法
2.2.1 奶牛子宫内膜组织体外培养方法
2.2.2 金黄色葡萄球菌的活化及生长曲线的绘制方法
2.2.3 菌落计数方法
2.2.4 制备热灭活的金黄色葡萄球菌
2.2.5 金黄色葡萄球菌体外刺激奶牛子宫内膜组织试验
2.3 试验结果
2.3.1 金黄色葡萄球菌生长曲线
2.3.2 金黄色葡萄球菌菌落形态
2.3.3 荧光定量PCR溶解曲线
2.3.4 金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织中IL-6、TNF-α mRNA表达影响
2.4 讨论
2.5 小结
3 研究二 金黄色葡萄球菌诱导奶牛子宫内膜组织炎症相关因子表达中PGE的作用
3.1 试验材料与主要仪器设备
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验主要仪器设备
3.1.3 试验所用试剂
3.2 试验方法
3.2.1 奶牛子宫内膜组织的体外培养
3.2.2 金黄色葡萄球菌处理奶牛子宫内膜组织
3.2.3 抑制剂与激动剂处理奶牛子宫内膜组织
3.2.4 奶牛子宫内膜组织总RNA的提取及反转录
3.2.5 荧光定量PCR反应
3.2.6 Elisa检测PGE2、IL-6与TNF-α的分泌量
3.2.7 奶牛子宫内膜组织总蛋白的提取
3.2.8 蛋白样品的处理
3.2.9 western blot
3.2.10 数据统计
3.3 试验结果
3.3.1 试验所用抑制剂、激动剂、阻断剂对子宫内膜中COX-2表达及PGE2分泌的影响
3.3.2 金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织中PGE2合成的影响
3.3.3 SB202190对热灭活金黄色葡萄球菌刺激组织中p38 MAPK表达的影响
3.3.4 PGE2对金黄色葡萄球菌刺激后的奶牛子宫内膜组织中IL-6与TNF-α的影响
3.4 讨论
3.5 小结
4 研究三金黄色葡萄球菌所致奶牛子宫内膜组织损伤过程中PGE2的调控作用
4.1 试验材料与主要仪器设备
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验主要仪器设备
4.1.3 试验所用试剂
4.2 试验方法
4.2.1 奶牛子宫内膜组织的体外培养
4.2.2 金黄色葡萄球菌处理奶牛子宫内膜组织
4.2.3 抑制剂与激动剂处理奶牛子宫内膜组织
4.2.4 奶牛子宫内膜组织总RNA的提取及反转录
4.2.5 荧光定量PCR反应
4.2.6 western-blot
4.2.7 制作奶牛子宫内膜组织H.E染色切片
4.2.8 制作奶牛子宫内膜组织冰冻切片
4.2.9 免疫荧光染色
4.2.10 数据统计
4.3 试验结果
4.3.1 PGE2对金黄色葡萄球菌刺激后的奶牛子宫内膜组织中HMGB-1、HABP-1 mRNA和蛋白表达的影响
4.3.2 PGE2对金黄色葡萄球菌刺激后的奶牛子宫内膜组织中HMGB-1、HABP-1 荧光表达的影响
4.3.3 PGE2对金黄色葡萄球菌引起奶牛子宫内膜组织损伤的影响
4.4 讨论
4.5 小结
5 研究四 金黄色葡萄球菌的活菌和热灭活菌对奶牛子宫内膜组织炎性因子表达的影响
5.1 试验材料与主要仪器设备
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验主要仪器设备
5.1.3 试验所用试剂
5.2 试验方法
5.2.1 体外培养奶牛子宫内膜组织
5.2.2 不同细菌感染体外培养的奶牛子宫内膜组织
5.2.3 奶牛子宫内膜组织总RNA的提取及反转录
5.2.4 荧光定量PCR反应
5.2.5 western blot
5.3 试验结果
5.3.1 LSA和HK-SA对奶牛子宫内膜组织IL-6和IL-1β表达的影响
5.3.2 LSA和HK-SA对奶牛子宫内膜组织TLR2受体表达的影响
5.3.3 LSA和大肠杆菌混合感染对奶牛子宫内膜组织IL-6、IL-1β表达的影响
5.3.4 LSA和HK-SA感染对奶牛子宫内膜组织中COX-2和mPGES-1表达的影响
5.3.5 LSA和HK-SA感染对奶牛子宫内膜组织PGE2和cAMP生成及EP4受体表达的影响
5.3.6 LSA和HK-SA感染对奶牛子宫内膜组织相关信号通路的影响
5.4 讨论
5.5 小结
6 全文结论
7 创新性
致谢
参考文献
作者简介
本文编号：4047503
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 奶牛子宫内膜炎
1.2 奶牛子宫内膜炎的分类
1.2.1 临床型奶牛子宫内膜炎
1.2.2 亚临床型奶牛子宫内膜炎
1.3 引起奶牛子宫内膜炎常见的细菌
1.4 金黄色葡萄球菌在奶牛子宫内膜炎中的研究现状
1.5 金黄色葡萄球菌致病机理
1.5.1 金黄色葡萄球菌的毒力因子
1.5.2 金黄色葡萄球菌的免疫逃避
1.5.3 金黄色葡萄球菌的耐药性
1.6 奶牛子宫对病原微生物的抵御机制
1.6.1 子宫内体液免疫反应
1.6.2 免疫细胞反应
1.6.3 释放细胞因子
1.7 调控免疫反应的细胞膜受体及其信号通路
1.7.1 Toll样受体
1.7.2 MAPKs细胞信号通路
1.7.3 NF-κB信号通路
1.7.4 TLR2、MAPK、NF-κB的相互关联
1.7.5 类固醇类激素调控子宫内免疫反应
1.8 PGE2的合成与降解过程及其在炎症反应中的作用
1.8.1 PGE2的合成与降解过程
1.8.2 PGE2及其受体对炎症反应的调控
1.9 致病菌引起的奶牛子宫内膜组织损伤及评价损伤的相关因子
1.9.1 致病菌感染引起的组织损伤
1.9.2 评价损伤的相关因子
1.10 本研究的目的及意义
2 研究一 金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织中促炎性细胞因子表达的影响
2.1 试验材料与主要仪器设备
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验设备及主要仪器
2.1.3 试验所用试剂
2.2 试验方法
2.2.1 奶牛子宫内膜组织体外培养方法
2.2.2 金黄色葡萄球菌的活化及生长曲线的绘制方法
2.2.3 菌落计数方法
2.2.4 制备热灭活的金黄色葡萄球菌
2.2.5 金黄色葡萄球菌体外刺激奶牛子宫内膜组织试验
2.3 试验结果
2.3.1 金黄色葡萄球菌生长曲线
2.3.2 金黄色葡萄球菌菌落形态
2.3.3 荧光定量PCR溶解曲线
2.3.4 金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织中IL-6、TNF-α mRNA表达影响
2.4 讨论
2.5 小结
3 研究二 金黄色葡萄球菌诱导奶牛子宫内膜组织炎症相关因子表达中PGE的作用
3.1 试验材料与主要仪器设备
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验主要仪器设备
3.1.3 试验所用试剂
3.2 试验方法
3.2.1 奶牛子宫内膜组织的体外培养
3.2.2 金黄色葡萄球菌处理奶牛子宫内膜组织
3.2.3 抑制剂与激动剂处理奶牛子宫内膜组织
3.2.4 奶牛子宫内膜组织总RNA的提取及反转录
3.2.5 荧光定量PCR反应
3.2.6 Elisa检测PGE2、IL-6与TNF-α的分泌量
3.2.7 奶牛子宫内膜组织总蛋白的提取
3.2.8 蛋白样品的处理
3.2.9 western blot
3.2.10 数据统计
3.3 试验结果
3.3.1 试验所用抑制剂、激动剂、阻断剂对子宫内膜中COX-2表达及PGE2分泌的影响
3.3.2 金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织中PGE2合成的影响
3.3.3 SB202190对热灭活金黄色葡萄球菌刺激组织中p38 MAPK表达的影响
3.3.4 PGE2对金黄色葡萄球菌刺激后的奶牛子宫内膜组织中IL-6与TNF-α的影响
3.4 讨论
3.5 小结
4 研究三金黄色葡萄球菌所致奶牛子宫内膜组织损伤过程中PGE2的调控作用
4.1 试验材料与主要仪器设备
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验主要仪器设备
4.1.3 试验所用试剂
4.2 试验方法
4.2.1 奶牛子宫内膜组织的体外培养
4.2.2 金黄色葡萄球菌处理奶牛子宫内膜组织
4.2.3 抑制剂与激动剂处理奶牛子宫内膜组织
4.2.4 奶牛子宫内膜组织总RNA的提取及反转录
4.2.5 荧光定量PCR反应
4.2.6 western-blot
4.2.7 制作奶牛子宫内膜组织H.E染色切片
4.2.8 制作奶牛子宫内膜组织冰冻切片
4.2.9 免疫荧光染色
4.2.10 数据统计
4.3 试验结果
4.3.1 PGE2对金黄色葡萄球菌刺激后的奶牛子宫内膜组织中HMGB-1、HABP-1 mRNA和蛋白表达的影响
4.3.2 PGE2对金黄色葡萄球菌刺激后的奶牛子宫内膜组织中HMGB-1、HABP-1 荧光表达的影响
4.3.3 PGE2对金黄色葡萄球菌引起奶牛子宫内膜组织损伤的影响
4.4 讨论
4.5 小结
5 研究四 金黄色葡萄球菌的活菌和热灭活菌对奶牛子宫内膜组织炎性因子表达的影响
5.1 试验材料与主要仪器设备
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验主要仪器设备
5.1.3 试验所用试剂
5.2 试验方法
5.2.1 体外培养奶牛子宫内膜组织
5.2.2 不同细菌感染体外培养的奶牛子宫内膜组织
5.2.3 奶牛子宫内膜组织总RNA的提取及反转录
5.2.4 荧光定量PCR反应
5.2.5 western blot
5.3 试验结果
5.3.1 LSA和HK-SA对奶牛子宫内膜组织IL-6和IL-1β表达的影响
5.3.2 LSA和HK-SA对奶牛子宫内膜组织TLR2受体表达的影响
5.3.3 LSA和大肠杆菌混合感染对奶牛子宫内膜组织IL-6、IL-1β表达的影响
5.3.4 LSA和HK-SA感染对奶牛子宫内膜组织中COX-2和mPGES-1表达的影响
5.3.5 LSA和HK-SA感染对奶牛子宫内膜组织PGE2和cAMP生成及EP4受体表达的影响
5.3.6 LSA和HK-SA感染对奶牛子宫内膜组织相关信号通路的影响
5.4 讨论
5.5 小结
6 全文结论
7 创新性
致谢
参考文献
作者简介
本文编号：4047503
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/4047503.html
最近更新
教材专著
