基因Ⅰ型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备及其对小鼠的免疫原性分析

发布时间：2025-05-28 01:57

　　 降低猪场的流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis, JE）感染率对于阻断人的JE暴发至关重要,鉴于我国JE防控形势的紧迫性和现有基因Ⅲ型商品化乙型脑炎病毒疫苗对部分基因Ⅰ型乙型脑炎病毒（genotypeⅠJapanese encephalitis virus, GⅠJEV）流行毒株免疫保护的不确定性,急需研制安全高效、成本低廉的新型猪用GI JEV疫苗。本研究在杆状病毒载体pFastBac^TM多克隆酶切位点插入GⅠJEV的prME基因表达盒,测序验证后的阳性重组质粒转染DH10Bac^TM感受态细胞后获得Bacmid-prME重组杆粒,进一步将其转染至Sf9昆虫细胞后,获得Bac-prME重组杆状病毒。Western blot、间接免疫荧光及电镜观察GⅠJEV病毒样颗粒组成蛋白表达及病毒样颗粒形成情况,通过小鼠免疫试验初步评价GⅠJEV病毒样颗粒的免疫原性。Sf9昆虫细胞中prME基因表达盒编码的蛋白得到高效表达,且组装形成病毒样颗粒。病毒样颗粒免疫原性评估结果表明:GⅠJEV病毒样颗粒可诱导免疫小鼠产生高滴度的乙型脑炎病毒...

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图3 Bac-prME 感染Sf9细胞的间接免疫荧光结果

图2典型的细胞病变图4prME蛋白表达的免疫印迹分析

图4 prME蛋白表达的免疫印迹分析

图3Bac-prME感染Sf9细胞的间接免疫荧光结果图5JEVVLPs的电镜图像

图5 JEV VLPs的电镜图像

图4prME蛋白表达的免疫印迹分析2.4JEVVLPs的免疫原性评价

图6 JEV VLPs诱导的抗体水平动态曲线

噬斑减少中和试验(FRNT)测定免疫后第42天分离制备的各免疫组小鼠血清的JEV中和抗体效价,结果显示,本研究制备的JEVVLPs在不加免疫佐剂的情况下免疫小鼠能够诱导产生针对基因Ⅰ型JEV高滴度的中和抗体(图7a),VLP200免疫组的平均中和抗体效价为1∶160,....

本文编号：4047900