DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

发布时间：2025-06-18 22:54

　　 旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1(DDR1)基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(早凋、晚凋)的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖(P<0.01),细胞早凋与晚凋比例极显著上升(P<0.01);干扰组G1期细胞比例极显著上升(P<0.01),S期细胞比例极显著下降(P<0.01),G2期细胞比例显著下降(P<0.05),提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖(P<0.05),显著抑制细胞晚期凋亡(P<0.05),G1期细胞比例极显著下...

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂及材料
    1.2 方法
        1.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养
        1.2.2 奶牛DDR1基因干扰片段的合成及转染
        1.2.3 pcDNA3.1-DDR1过表达载体的构建及转染
        1.2.4 奶牛DDR1基因及增殖凋亡相关基因定量引物的设计与合成
        1.2.5 奶牛乳腺上皮细胞DDR1基因PCR扩增及电泳
        1.2.6 qRT-PCR检测DDR1及增殖凋亡相关基因表达
        1.2.7 Western blot检测DDR1的蛋白表达水平
        1.2.8 CCK-8法检测奶牛乳腺上皮细胞增殖
        1.2.9 流式细胞术检测奶牛乳腺上皮细胞周期
        1.2.10 流式细胞术检测奶牛乳腺上皮细胞凋亡
        1.2.11 数据统计
2 结 果
    2.1 DDR1在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
    2.2 奶牛乳腺上皮细胞中DDR1的干扰和过表达效果检测
    2.3 干扰、过表达DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响
    2.4 干扰、过表达DDR1对奶牛乳腺上皮细胞周期的影响
    2.5 干扰、过表达DDR1对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响
    2.6 干扰、过表达DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖凋亡相关基因表达的影响
3 讨 论
    3.1 DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡、周期的影响
    3.2 DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡相关基因表达的影响
4 结 论



本文编号：4050460