TGIF1对奶山羊卵巢颗粒细胞E2/P4分泌及凋亡作用的研究

发布时间：2025-06-24 01:50

　　TG相互作用因子1(TGIF1)是TALE(转录激活因子样效应蛋白)同源结构域蛋白家族成员之一。研究表明,TGIF1可通过招募组蛋白乙酰化抑制转录因子活性从而抑制TGF-β信号通路的活性,而TGF-β1能够调节卵巢颗粒细胞激素的分泌、增殖和凋亡。目前,TGIF1调节奶山羊卵巢颗粒细胞分泌E2、P4和凋亡的作用尚不明确。本研究以关中奶山羊为研究对象,通过构建TGIF1过表达载体和TGIF1-si RNA研究TGIF1对卵巢颗粒细胞E2/P4分泌及对卵巢颗粒细胞凋亡的影响,阐明TGIF1在卵泡发育及闭锁中的生物功能,主要获得以下研究结果:1.构建TGIF1过表达载体及合成TGIF1-si RNA通过NCBI预测TGIF1基因CDS区全长,扩增出819bp CDS区全长序列。构建含有HindⅢ与XhoⅠ酶切位点的TIGF1过表达载体命名为pc DNA3.1-TGIF1,同时合成TGIF1基因干扰RNA命名为TGIF1-si RNA;用RT-q PCR及Western blot检测技术检测TGIF1的过表达及干扰效率,结果发现,pc DNA3.1-TGIF1可显著升高TGIF1的表达;TGIF1...

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 文献综述
    1.1 卵泡发育
        1.1.1 卵泡发育的研究进展
        1.1.2 颗粒细胞对卵泡发育的作用
        1.1.3 类固醇对卵泡发育的作用
    1.2 TGIF1 基因的研究进展
        1.2.1 TGIF家族概述
        1.2.2 TGIF1 的调控功能
        1.2.3 TGIF1与TGF-β信号通路
    1.3 TGF-β信号通路研究进展
        1.3.1 TGF-β超家族对卵泡发育的作用
        1.3.2 TGF-β1 信号通路对颗粒细胞的作用
    1.4 SP1 研究进展
        1.4.1 SP家族概况
        1.4.2 SP1 的转录功能
        1.4.3 SP1 在颗粒细胞中的作用
    1.5 研究的目的及意义
    1.6 研究思路及技术路线
        1.6.1 研究思路
        1.6.2 技术路线
第二章 TGIF1 对奶山羊卵巢颗粒细胞E2/P4 分泌的作用
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 样品采集
        2.2.2 仪器设备
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 TGIF1 过表达载体的构建
        2.2.5 TGIF1 干扰RNA的合成
        2.2.6 颗粒细胞(GCs)的培养与转染
        2.2.7 RT-qPCR检测
        2.2.8 ELISA检测
        2.2.9 Western blot检测
        2.2.10 统计学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 奶山羊卵巢颗粒细胞的鉴定
        2.3.2 TGIF1 过表达载体构建结果
        2.3.3 TGIF1 过表达及干扰效率检测
        2.3.4 ELISA检测TGIF1 对颗粒细胞E2/P4 分泌的影响
        2.3.5 RT-qPCR检测激素合成关键酶基因的表达
        2.3.6 Western blot检测激素合成相关基因的表达
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 TGIF1 通过TGF-β信号通路调节E2/P4 的分泌
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 样品采集
        3.2.2 仪器设备
        3.2.3 主要试剂
        3.2.4 卵巢颗粒细胞的培养与转染
        3.2.5 SP1 干扰RNA的合成
        3.2.6 RT-qPCR
        3.2.7 ELISA检测
        3.2.8 Western blot检测
        3.2.9 统计学分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 KGN处理对卵巢颗粒细胞E2/P4 分泌的影响
        3.3.2 KGN对 SMAD2/3 磷酸化的影响
        3.3.3 TGIF1对KGN处理后颗粒细胞E2/P4 分泌的影响
        3.3.4 TGIF1对SMAD2/3 表达及磷酸化的影响
        3.3.5 TGIF1 对转录因子SP1 表达的影响
        3.3.6 SP1 干扰RNA的合成及效率检测
        3.3.7 Western blot检测共转染TGIF1和SP1 对激素关键酶基因表达的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 TGIF1 对奶山羊卵巢颗粒细胞凋亡作用的研究
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 样品采集
        4.2.2 仪器设备
        4.2.3 主要试剂
        4.2.4 细胞流式检测凋亡
        4.2.5 RT-qPCR检测
        4.2.6 统计学分析
        4.2.7 Western blot检测
    4.3 结果与分析
        4.3.1 TGIF1 对卵巢颗粒细胞凋亡的影响
        4.3.2 RT-qPCR检测凋亡相关基因表达
        4.3.3 Western blot检测BCL-2/BAX基因表达
    4.4 讨论
    4.5 小结
研究结论
创新点
进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：4052316