贝氏隐孢子虫转染载体的构建和瞬时转染

发布时间：2025-06-23 23:14

　　隐孢子虫病是重要的人兽共患原虫病。转染技术是指将外源基因导入真核细胞内，并在细胞内表达的技术。运用转染技术，构建隐孢子虫转染载体，将会为研究隐孢子虫基因功能，筛选药物靶基因和保护性抗原基因提供有效的工具。本研究以贝氏隐孢子虫为模型，以黄色荧光蛋白为标记分子构建隐孢子虫转染载体，并通过限制性内切酶介导的整合转染方法在鸡体内建立隐孢子虫转染系统。 首先，120只雏鸡分为5组，分别采用直肠接种子孢子，嗉囊接种卵囊，直肠接种卵囊，嗉囊接种子孢子和嗉囊接种PBS液五种接种方法进行接种。在接种后检测各组排卵囊情况，并取法氏囊和气管等组织制作组织切片和扫描电镜切片。结果发现，嗉囊接种卵囊和直肠接种子孢子两个实验组，相对于嗉囊接种子孢子和直肠接种卵囊组在排卵囊高峰期收集到的卵囊数量更多，这说明嗉囊接种卵囊和直肠接种子孢子组为本实验的最佳接种途径；观察组织切片和电镜切片，发现嗉囊接种卵囊、直肠接种子孢子以及直肠接种卵囊组的法氏囊粘膜层均附着有大量的贝氏隐孢子虫带虫空泡，而仅在嗉囊接种卵囊组的气管粘膜表面观察到少量虫体，感染有卵囊的法氏囊和气管粘膜层均有不同程度的损伤，这说明不同的接种途径对贝氏隐孢子虫...

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【部分图文】：

图1-1隐孢子虫水源性传播Table1-1ThewaterbornespreadofCryptosporidium

子孢子为月牙形，残留体则是由颗粒状的物质和一个空子排列一般不整齐，残留体颜色为暗黑色或暗棕色；感染人类的主人隐孢子虫（C.hominis），其卵囊直径大概为4.6-5.4μm，囊壁厚度，卵囊呈圆形或近圆形；另一个比较重要的隐孢子虫——安氏隐孢rsoni）主要寄生于反刍动物的....

图2-1HE染色法以及改良抗酸染色法镜下观察C.baileyi

1HE染色法以及改良抗酸染色法镜下观察C.baileyi。图A（×400）和图D（×100接种子孢子实验组中法氏囊黏膜层上大量处于各种阶段的虫体；图B（×400）为直囊组的法氏囊和嗉囊接种卵囊组的法氏囊切片图（嗉囊接种卵囊组未给出）。图C（管切片图之一，没有观察到有....

图2-2扫描电镜观察嗉囊和直肠接种卵囊和子孢子法氏囊和气管粘膜表面C.baileyi

镜观察嗉囊和直肠接种卵囊和子孢子法氏囊和气管粘膜表面C.ba×2000）和D（×2000）分别为直肠接种子孢子，嗉囊接种卵囊以氏囊表面附着着大量内生阶段C.baileyi带虫空泡；图F（×2000）面附着的少量C.baileyi虫体；图E（×2000）显示为直肠接....

图2-3B嗉囊接种卵囊组鸡血液中C.baileyi的PCR检测

A直肠接种子孢子组鸡血液中C.baileyi的PCR检测。Lane部分序列为阳性对照；Lane2-11：阴性对照组和接种后12h,h,144h,168hand192h采集的检测血样组。2-3APCRexaminationofC.ba....

本文编号：4052140