融合表达IgY/IgG Fc片段和H9N2禽流感病毒HA1转基因艾美耳球虫的构建及免疫原性研究

发布时间：2025-06-25 22:55

　　H9N2亚型禽流感病毒灭活疫苗主要激发体液免疫应答,临床上高抗体水平的禽群感染H9N2禽流感病毒发病的情况时有发生。研究表明细胞免疫更有利于阻止流感病毒的感染,因此研制高效的H9N2禽流感病毒疫苗变得极为重要。哺乳动物IgG Fc片段可以作为分子佐剂增强与其融合蛋白的细胞免疫应答和体液免疫应答。本研究室前期研究表明鸡艾美耳球虫(Eimeria species)具有作为疫苗活载体的潜能。因此,本论文用融合表达禽IgY Fc或鼠IgG Fc片段和H9N2亚型流感病毒HA1的转基因艾美耳球虫为活载体疫苗,以鸡和小鼠为动物模型研究Fc片段对球虫和流感病毒抗原的免疫增强作用。 本研究首先用原核表达的融合蛋白检测了禽IgY Fc片段对H9N2流感病毒保护性抗原HA/HA1的免疫增强作用。研究发现融合蛋白HAlchFc降低了免疫组鸡群流感病毒的排出,表明禽IgY Fc片段具有类似哺乳动物IgG Fc片段的分子佐剂功能。基于此研究,我们分别构建了表达鸡IgY Fc片段(Emi.chFc, Et.chFc、H9N2流感病毒HA1(Emi.HA1,Et.HA1)、表达鸡IgY Fc和HA1的融合蛋白(Em...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-3哺乳动物IgG和禽类IgY的分子结构(引自Warre/fl/.,Immunologytoday1995)

■0)4区与哺乳动物IgG的Cy2和Cy3具存同源性；Cu2是IgG的铰链区，而它在IgY中没有得到充分进化（图1-3)。在鸭子中IgY的存在形式勾之不同，是截短耶的IgY(AFc)，不存在Q)3和Cu4区[44]。Hinge Potentialswitchregions....

图1-4哺乳动物IgG受体FcRn、禽类IgY受体FcRY和甘露糖受体家族成员的结构示意图

(IgG)的功能相似，但是结构差别很大。哺乳动物FcRn的结构类似MHC丨类分子，而禽类FcRY的结构勾甘露糖受体家族成员隣脂_A2受体同源性很高（图1-4）。FcRY是I类膜蛋A，含有1459个氨基酸残基，由胞外域、跨膜区域和胞内域组成。FcRY的胞外域足抗....

图2-3HA/HAI蛋白的原核表达与鉴定Aa.含有i毎切位点的HA基因彳广増：Ab.HA基因连接F"et28a载体后的PCR鉴定图；Ac.重组质粒Pet28aHA的酶切鉴定图

图2-3HA/HAI蛋白的原核表达与鉴定位点的HA基因彳广増：Ab.HA基因连接F"et28a载体后的PCR鉴定图；Ac.重组质粒Pet28aHA。Ba.Pet28aHA蛋白的小量诱导SDS-PAGE电泳图：I,未诱导菌体：2,ImMIPTG诱导2h;G诱导4h:4....

图2-4HA/HAl和禽IgYFc片段的融合蛋白的原核表达与鉴定Aa.以序列合成后的pGSUlAchFc质粒为模板『增HachFc基因；Ab.基因HAcliFc连接Pet2丨a载体后的PCR鉴18

IIAI蛋白western鉴定图。I,稀释后的pet28丨丨Al蛋白样品：2,未诱导囷体sladder,分子量大小（bp)分别为5000.2000.1000.750.500.250.100.Fig.2-3ProkaryoticexpressionofHA/H....

本文编号：4052746