鹅TLR7和TLR21的分子克
发布时间：2025-06-26 00:51
Toll样受体是机体内一类重要的病原识别受体,能对入侵机体的病原微生物进行及时的识别,从而启动机体固有免疫应答并影响适应性免疫的产生。本研究首次克隆并报道了四川白鹅Toll样受体家族的TLR7和TLR21的cDNA序列,并进行了生物信息学分析。鹅TLR7包含一个完整的开放阅读框,编码1045个氨基酸,其信号肽位于第1到27位,跨膜区位于第836位到860位,高度保守TIR结构域位于第884位到1034位。鹅TLR21包含一个完整的开放阅读框,编码975个氨基酸,其信号肽位于第1到35位,跨膜区位于第757位到779位,高度保守TIR结构域位于第809位到951位。比较两基因在不同物种之间蛋白二级结构和三级结构,发现物种之间亲缘关系越接近比对相似性越高。为了得到TLR7和TLR21在鹅体各个组织的分布情况,我们利用半定量RT-PCR和定量RT-PCR方法构建了组织表达谱。整个实验过程中,选择β-actin和GAPDH 作为内参基因对实验结果校正检测。我们发现：TLR7的转录水平在雏鹅的法氏囊上最高,且在与免疫功能相关的组织如盲肠,哈德氏腺等也相对较高。值得注意的是,肺脏的相对表达量仅次于法...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
1 Toll样受体的结构与功能
2 脊椎动物的病原核酸识别Toll受体的研究进展
2.1 核酸识别Toll样受体在哺乳动物中的研究进展
2.2 禽类的病原核酸识别Toll样受体的研究进展
3 本实验的研究目的及意义
第二章 鹅TLR7和TLR21基因的分子克隆
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 菌种与质粒
1.3 主要实验仪器和设备
1.4 实验试剂
1.5 相关溶液配制
2 实验方法与操作
2.1 鹅TLR7和TLR21部分cDNA片段的扩增
2.2 目的基因片段的克隆与测序
2.3 鹅TLR7和TLR21的cDNA全长扩增
2.4 序列分析
3 实验结果
3.1 鹅TLR7和TLR21核酸及氨基酸序列分析
3.2 鹅及其他动物的TLR7和TLR21氨基酸多序列比对分析
3.3 鹅及其他动物TLR7和TLR21氨基酸序列进化树分析
4 实验讨论
5 本章小结
第三章 鹅TLR7和TLR21的组织表达谱
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 正常鹅组织的选取与总RNA的提取
2.2 反转录合成cDNA第一链
2.3 半定量RT-PCR
2.4 定量RT-PCR
3 实验结果
3.1 鹅TLR7的雏鹅组织表达谱
3.2 鹅TLR7在成年鹅与雏鹅免疫相关组织表达比较
3.3 鹅TLR21在成年鹅与雏鹅全组织表达比较
4 实验讨论
4.1 TLR7在雏鹅组织转录情况分析
4.2 TLR7在成年鹅和雏鹅的免疫器官中的转录水平比较
4.3 TLR21在成年鹅和雏鹅的组织器官中的转录水平比较
5 本章小结
第四章 鹅TLR7和TLR21的免疫学活性检测
1 实验材料
1.1 实验动物及毒株
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 鹅淋巴细胞模型的建立
2.2 激动剂处理鹅淋巴细胞的免疫应答检测
2.3 鹅淋巴细胞应对病毒感染的免疫应答检测
3 实验结果
3.1 免疫刺激剂刺激鹅脾脏淋巴细胞
3.2 NGVEV感染鹅脾脏淋巴细胞
3.3 免疫刺激剂刺激鹅外周血淋巴细胞
3.4 NGVEV感染鹅外周血淋巴细胞
4 实验讨论
4.1 免疫刺激剂对鹅脾脏淋巴细胞的影响
4.2 NGVEV对鹅脾脏淋巴细胞的影响
4.3 免疫刺激剂对鹅外周血淋巴细胞的影响
4.4 NGVEV对鹅外周血淋巴细胞的影响
5 本章小结
参考文献
致谢
作者简介及发表论文情况
本文编号：4052890
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
1 Toll样受体的结构与功能
2 脊椎动物的病原核酸识别Toll受体的研究进展
2.1 核酸识别Toll样受体在哺乳动物中的研究进展
2.2 禽类的病原核酸识别Toll样受体的研究进展
3 本实验的研究目的及意义
第二章 鹅TLR7和TLR21基因的分子克隆
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 菌种与质粒
1.3 主要实验仪器和设备
1.4 实验试剂
1.5 相关溶液配制
2 实验方法与操作
2.1 鹅TLR7和TLR21部分cDNA片段的扩增
2.2 目的基因片段的克隆与测序
2.3 鹅TLR7和TLR21的cDNA全长扩增
2.4 序列分析
3 实验结果
3.1 鹅TLR7和TLR21核酸及氨基酸序列分析
3.2 鹅及其他动物的TLR7和TLR21氨基酸多序列比对分析
3.3 鹅及其他动物TLR7和TLR21氨基酸序列进化树分析
4 实验讨论
5 本章小结
第三章 鹅TLR7和TLR21的组织表达谱
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 正常鹅组织的选取与总RNA的提取
2.2 反转录合成cDNA第一链
2.3 半定量RT-PCR
2.4 定量RT-PCR
3 实验结果
3.1 鹅TLR7的雏鹅组织表达谱
3.2 鹅TLR7在成年鹅与雏鹅免疫相关组织表达比较
3.3 鹅TLR21在成年鹅与雏鹅全组织表达比较
4 实验讨论
4.1 TLR7在雏鹅组织转录情况分析
4.2 TLR7在成年鹅和雏鹅的免疫器官中的转录水平比较
4.3 TLR21在成年鹅和雏鹅的组织器官中的转录水平比较
5 本章小结
第四章 鹅TLR7和TLR21的免疫学活性检测
1 实验材料
1.1 实验动物及毒株
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 鹅淋巴细胞模型的建立
2.2 激动剂处理鹅淋巴细胞的免疫应答检测
2.3 鹅淋巴细胞应对病毒感染的免疫应答检测
3 实验结果
3.1 免疫刺激剂刺激鹅脾脏淋巴细胞
3.2 NGVEV感染鹅脾脏淋巴细胞
3.3 免疫刺激剂刺激鹅外周血淋巴细胞
3.4 NGVEV感染鹅外周血淋巴细胞
4 实验讨论
4.1 免疫刺激剂对鹅脾脏淋巴细胞的影响
4.2 NGVEV对鹅脾脏淋巴细胞的影响
4.3 免疫刺激剂对鹅外周血淋巴细胞的影响
4.4 NGVEV对鹅外周血淋巴细胞的影响
5 本章小结
参考文献
致谢
作者简介及发表论文情况
本文编号：4052890
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/4052890.html
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