PKC/NADPH氧化应激途径对大鼠心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的影响

发布时间：2025-06-18 23:00

　　 目的观察体外原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞内PKC/NADPH氧化应激途径在eNOS脱偶联中的作用。方法用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100 mg/L)与LY33531(PKC抑制剂)和DPI(NADPH抑制剂)分别作用大鼠心脏微血管内皮细胞(24 h),HPLC法检测BH4,试剂盒检测NO和O2-生成,免疫组化检测eNOS蛋白表达,Western blot法检测P47phox蛋白表达。结果随着LY33531和DPI浓度(5、10和20μmol/L)的增加,eNOS脱偶联状态减轻:NO生成逐渐增加(90.7±0.3～122.6±0.3,160.6±0.6,P<0.05),而O2-生成逐渐减少(P<0.05),eNOS表达逐渐减少(126.1±3.5～112.6±1.7,114.4±1.8,P<0.05),而BH4含量逐渐增加(P<0.05)。同时,ROS表达和P47phox表达减少(P<0.05)。结论 NADPH氧化应激途径可能参与AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的发生。而AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞内NADPH氧化...

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图1大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养Fig1Theprimarycultureofcardiacmicrovascular

的DCF。用无血清的培养基清洗细胞两次，再加入DCFH-DA(1∶1000稀释)，37℃孵育箱中孵育20min后胰蛋白酶消化，1mL无血清的培养基重悬细胞，荧光显微镜观察细胞内ROS的荧光强度。1.10Westernblot测定P47phox具体步骤略。实验结果采用eNOS/β-....

图2AGEs和DPI对心脏微血管内皮细胞eNOS表达的影响

成永霞PKC/NADPH氧化应激途径对大鼠心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的影响A.showedAGEs100mg/Lgroup;B.showedDPI10μmol/Lgroup(×200)图2AGEs和DPI对心脏微血管内皮细胞eNOS表达的影响Fig2EffectsofAGE....

图3AGEs和LY33531对心脏微血管内皮细胞

基础医学与临床Basic＆ClinicalMedicine2013.33(1)*P＜0.01compairedwithcontrol;#P＜0.05，##P＜0.01compairedwithAGEs图3AGEs和LY33531对心脏微血管内皮细胞ROS表达的影响Fig3Effe....

图4AGEs和LY33531对心脏微血管内皮细胞P47phox蛋白表达的影响

本文编号：4050467