Oct4互作lncRNA Osclr8对细胞重编程的作用及机制

发布时间：2025-06-19 02:00

　　背景及目的:诱导终末分化的细胞发生重编程,实现逆生长,重新获得全能性而成为诱导多能干细胞(iPSCs)是科学史上的一项重大突破。iPSCs与胚胎干细胞相似,具有自我更新和多向分化的潜能,并且不存在免疫排斥和伦理问题,具有很好的研究及应用前景。但目前,诱导多能干细胞的临床应用仍存在技术瓶颈,如诱导效率、安全问题等,重编程的机制也并不完全清楚。因此,深入研究细胞重编程的分子机制,探索决定细胞命运的关键因素,有助于获得更高效、更安全的诱导技术体系,对诱导多能干细胞将来的临床应用具有十分重要的意义。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在表观调控、转录调控等多个层面上参与编码蛋白基因的调控,已经被认为是一种维持多能干细胞干性与分化能力的新的分子机制,并且lncRNA以其独特的表观遗传学机制影响着细胞的命运。本研究筛选出一个与多能干性基因Oct4启动子结合,与重编程相关的lncRNA-Osclr8(Oct4-Sox2 coating long noncoding RNA 8),其仅在iPSCs中表达,而在成纤维细胞中不表达,将其敲低后,干细胞发生分化,撤出多能性。这...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1人体发育过程中多能干细胞的变化

iPSCs）和成体干细胞（adultstemcells）等。根据干细胞的分化能力，可以将干细胞分为以下几类[1]（如图1.1）：（1）全能干细胞（totipotentstemcells），可分裂分化发育成一个完整生物个体，具有最高的分化潜能，如受精卵，受精卵形成大约4天....

图3.2染色质-lncRNA原位逆转录捕获测序（CRIST-seq）原理图

lncRNA（如图3.2）。因为激活Oct4这个主要干细胞因子是体细胞重编程以及多能干性维持的所必须的。我们假设这个主要核心因子的启动子染色质区域有很多元件与其相互作用，特别是在重编程过程中可能有很多lncRNA被活化，可能会参与染色质重塑的过程。因此我们设计了两条Oc....

图3.3Cas9-gRNA特异性结合Oct4的验证

证Cas9-gRNA结合Oct4的特异性ST-seq是通过实验来确定我们设计的Cas9-gRNA能够准确的结Oct4启动子区域，因此以随机gRNA以及空质粒作为阴性对NA一起构建质粒、病毒包装，进行上述实验，最后进行验证实PCR的方法检测。结果发现Ca....

图3.4与Oct4相结合的lncRNA示意图

吉林大学博士学位论文FigureA:wedesignprimerstotestthespecificityoftheCRISTtargeting.WechosepOct4targetingsiteandothersite,including....

本文编号：4050678