NFAT1调控的IL6/IL6R信号通路对胶质瘤生长和侵袭作用研究

发布时间：2025-06-04 03:21

　　1.背景与目的胶质瘤是中枢神经系统发生率最高的原发性恶性肿瘤疾病,具有极高的死亡率。目前,胶质瘤的主要治疗方法是手术结合放化疗的综合治疗方案,但患者治疗效果普遍不佳,极易复发,生存时间较短。基于肿瘤免疫和免疫杀伤机制的抗肿瘤免疫治疗被视为最有希望治愈胶质瘤及其它恶性肿瘤的方法。随着肿瘤发生、发展机制和肿瘤免疫反应研究的深入,免疫微环境的重要性日益显现。胶质瘤免疫微环境的组成成分极为复杂,包括胶质瘤细胞、浸润的各型淋巴细胞、小胶质细胞、内皮细胞、部分实质细胞等多种细胞以及上述细胞合成、分泌的细胞因子、生长因子、趋化因子等,共同发挥促进肿瘤生长、血管发生、侵袭和抗凋亡等作用。因此,针对肿瘤免疫微环境的研究,有助于了解和明确微环境中不同细胞和细胞因子在肿瘤发生、发展过程中的作用,并寻找潜在的肿瘤免疫治疗靶点。白介素6（Interleukin 6,IL6）是本课题组前期采用生物信息学分析,于中国胶质瘤基因组图谱计划（Chinese Glioma Genome Atlas,CGGA）和癌症基因组图谱计划（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中筛选出的胶质母细胞瘤免疫相关...

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 IL6、IL6R在胶质瘤不同分子分型中的表达及预后意义
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 胶质瘤细胞系和患者来源胶质瘤干细胞提取及培养试剂
            2.1.2 免疫荧光相关试剂和材料
            2.1.3 蛋白免疫印迹相关试剂和材料
            2.1.4 RNA提取及荧光定量PCR试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 生物信息学检测胶质瘤中IL6、IL6R的表达、预后意义
            2.2.2 胶质瘤细胞培养
            2.2.3 患者来源胶质瘤干细胞提取及培养
            2.2.4 患者来源胶质瘤干细胞的鉴定
            2.2.5 患者来源胶质瘤干细胞中IL6、IL6R的表达
    3 结果
        3.1 在TCGA胶质母细胞瘤数据库中,间质型IL6、IL6R的表达最高
        3.2 在TCGA胶质瘤数据库中,IDH野生型IL6、IL6R的表达高于突变型
        3.3 在TCGA胶质瘤、胶质母细胞瘤、Rembrandt胶质瘤数据库中,IL6、IL6R的表达均具有预后意义
        3.4 患者来源胶质瘤干细胞的鉴定和分型
            3.4.1 胶质瘤干细胞的鉴定
            3.4.2 胶质瘤干细胞的分型
        3.5 IL6、IL6R在间质型患者来源胶质瘤干细胞中表达最高
        3.6 胶质瘤细胞系中IL6R的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 IL6R对胶质瘤增殖、侵袭、凋亡的调控和介导IL6的促进胶质瘤作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 胶质瘤细胞系及培养试剂
            2.1.2 慢病毒及感染试剂
            2.1.3 细胞功能学实验相关试剂和材料
            2.1.4 免疫组化相关试剂和材料
            2.1.5 蛋白免疫印迹、qPCR相关试剂和材料同第一部分
            2.1.6 实验动物
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 慢病毒感染
            2.2.3 蛋白免疫印迹实验
            2.2.4 qPCR实验
            2.2.5 细胞活性检测
            2.2.6 集落形成实验
            2.2.7 细胞划痕实验
            2.2.8 神经球形成实验
            2.2.9 Transwell实验
            2.2.10 Tunel凋亡检测
            2.2.11 免疫组化
            2.2.12 HE染色
            2.2.13 裸鼠皮下成瘤实验
            2.2.14 裸鼠颅内成瘤实验
    3 结果
        3.1 IL6R稳定过表达和沉默胶质瘤细胞的构建
        3.2 IL6R对胶质瘤细胞增殖活性的调控
        3.3 IL6R对胶质瘤细胞迁移和侵袭的调控
        3.4 IL6R对胶质瘤凋亡的调控
        3.5 IL6R对肿瘤发生的调控
        3.6 IL6R介导IL6体外刺激对胶质瘤细胞增殖的调控
        3.7 IL6R介导IL6体外刺激对胶质瘤细胞迁移和侵袭的调控
        3.8 IL6R介导IL6体外刺激对胶质瘤细胞凋亡的调控
    4 讨论
    5 结论
第三部分 NFAT1调控IL6、IL6R的表达
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 胶质瘤细胞培养、蛋白免疫印迹、免疫荧光及qPCR相关试剂和材料
            2.1.2 慢病毒及感染试剂
            2.1.3 酶联免疫吸附试验(Elisa)
            2.1.4 双荧光素酶报告基因检测
            2.1.5 染色质免疫共沉淀实验
            2.1.6 实验动物
        2.2 实验方法
            2.2.1 胶质瘤细胞培养、蛋白免疫印迹、免疫荧光、qPCR等方法均同论文第一部分
            2.2.2 慢病毒感染同论文第二部分
            2.2.3 酶联免疫吸附试验
            2.2.4 双荧光素酶报告基因检测
            2.2.5 染色质免疫共沉淀
            2.2.6 裸鼠皮下成瘤
            2.2.7 生物信息学分析
    3 结果
        3.1 TCGA胶质瘤数据库中IL6、IL6R与NFAT1表达的相关性
        3.2 NFAT1调控胶质瘤细胞中IL6、IL6R的表达
        3.3 NFAT1直接参与IL6、IL6R的转录调控
        3.4 NFAT1调控肿瘤的发生
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4049235