TAGLN3在神经胶质瘤细胞系中功能及机制探索

发布时间：2025-06-19 03:26

　　实验背景:神经胶质瘤作为在脑部和脊髓中广泛存在的肿瘤,在中枢神经系统肿瘤中占到40%,年发病率高达3-8人每10万人。Tagln3在神经元发育和多种精神疾病与神经疾病上都扮演着重要作用,有文献报道和临床分析数据显示,Tagln3在神经胶质瘤中相比正常的脑组织处在低表达水平。故Tagln3在神经胶质瘤中可能发挥一定的调控作用,其背后的机制有助于了解中枢神经系统疾病与肿瘤发生之间的关系。实验方法与结果:我们使用Western Blot和qPCR的方法检测了 Tagln3在小鼠组织中的表达量,发现Tagln3在脑组织中特异性表达。同样在正常胶质细胞HEB和三种胶质瘤细胞GBM、U251和U87中检测了 Tagln3的表达水平,发现Tagln3在神经胶质瘤细胞中低表达。使用pEGFP-C1质粒构建了 Tagln3的真核表达载体。在U251细胞中过表达Tagln3能够抑制细胞的增殖,而用siRNA敲降Tagln3的表达促进了细胞的增殖。用流式细胞仪检测Tagln3对U251细胞周期的影响,发现过表达Tagln3能使U251细胞发生S期阻滞,从而抑制细胞的增殖。流式细胞仪检测过表达Tagln3对U2...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 神经胶质瘤概述
    1.2 Tagln3概述
        1.2.1 Tagln3蛋白结构
        1.2.2 Tagln3的功能及作用机制
        1.2.3 Tagln3与脑部疾病
        1.2.4 Tagln3与神经胶质瘤
    1.3 研究的目的与意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 小鼠组织、细胞系、质粒、siRNA、感受态细胞及cDNA
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器与耗材
        2.1.4 试剂和溶液的配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 实时定量PCR
        2.2.2 Western Blot蛋白印迹法
        2.2.3 细胞的培养
        2.2.4 重组质粒的构建
        2.2.5 细胞转染
        2.2.6 MTT细胞增殖实验
        2.2.7 流式细胞仪检测细胞周期
        2.2.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.2.9 寻找相互作用蛋白
        2.2.10 细胞划痕迁移实验
        2.2.11 Transwell细胞侵袭实验
第三章 实验结果与讨论
    3.1 Tagln3的表达分析
        3.1.1 Tagln3在小鼠组织中表达情况
        3.1.2 Tagln3在神经胶质瘤细胞的表达情况
    3.2 pEGFP-C1-Tagln3质粒载体的构建
    3.3 小干扰RNA敲降Tagln3效率验证
    3.4 Tagln3对神经胶质瘤细胞U251的影响
        3.4.1 Tagln3对U251增殖的影响
        3.4.2 Tagln3对U251细胞周期的影响
        3.4.3 Tagln3对U251细胞凋亡的影响
    3.5 寻找Tagln3在神经胶质瘤细胞U251中的相互作用蛋白
        3.5.1 pGEX-4T1-Tagln3原核表达载体的构建
        3.5.2 GST-Tagln3蛋白纯化
        3.5.3 在U251细胞中用GST large scale pull down寻找相互作用蛋白
    3.6 Tagln3与eEF1A2相互作用
        3.6.1 eEF1A2概述
        3.6.2 Tagln3与eEF1A2相关性分析
        3.6.3 pEGFP-C1-eEF1A2质粒载体的构建
        3.6.4 GST pull down验证Tagln3与eEF1A2的相互作用
        3.6.5 过表达或敲降Tagln3对eEF1A2蛋白表达的影响
    3.7 小干扰RNA对eEF1A2敲降效率的验证
    3.8 Tagln3与eEF1A2相互作用对U251细胞增殖的影响
    3.9 探索Tagln3在U251细胞中的调控通路
        3.9.1 肿瘤相关信号通路
        3.9.2 microRNA对Tagln3的调控作用
第四章 总结和展望
    4.1 总结
    4.2 展望
参考文献
硕士期间科研成果
致谢



本文编号：4050782