低氧对神经干细胞中miR-210的表达调控及功能研究

发布时间：2025-06-04 00:10

　　神经干细胞（Neural stem cells, NSCs）是存在于胚胎期神经系统和成体脑组织中的一类具有自我更新和分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞能力的干细胞。神经干细胞不仅对胚胎神经系统发育至关重要，也为各种中枢神经系统的损伤和疾病的治疗带来了希望。通过移植神经干细胞可以在动物或人体中治疗帕金森病、亨廷顿舞蹈症、肌萎缩侧索硬化症、阿兹海默症、多发性硬化症、中风和脊髓损伤等神经系统疾病。目前，神经干细胞的体外培养和扩增通常是在常氧即20%的氧浓度条件下进行的，而胚胎发育和成体脑组织中的氧浓度只有3-5%，甚至更低，这种现象被称作生理性低氧。近年来，越来越多的实验证据表明低氧对于神经干细胞的增殖和分化具有重要的调节作用。本实验室的研究结果表明，适度低氧能促进成年动物脑内和离体培养神经干细胞的增殖和分化。因此，研究低氧对神经干细胞存活、增殖和分化的调控具有重要的意义。 低氧诱导因子（Hypoxia-inducible factor, HIF）作为细胞和分子水平的低氧感知分子是低氧信号通路中关键的调控分子之一。低氧条件下，细胞中的HIF-1α稳定并转移至细胞核，通过与低氧反应元...

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
    一 神经干细胞
    二 低氧对神经干细胞的影响
    三 低氧调控的分子机制
    四 低氧与 miRNAs
第一部分 低氧对神经干细胞中 miR-210 的表达调控
    一、 实验材料和试剂
        （一） 实验动物
        （二） 主要仪器设备
        （三） 抗体
        （四） 主要试剂及常用配方
    二、 实验方法
        （一） 原代大鼠神经干细胞的分离培养和传代
        （二） 免疫荧光
        （三） RT-PCR 检测 mRNA 表达
        （四） Realtime-PCR 检测 miRNA 表达
        （五） 蛋白提取和 Western blot
        （六） MiR-210-sensor 载体构建
        （七） 细胞存活率分析
        （八） BrdU 掺入检测细胞增殖率
        （九） TUNEL 试剂盒检测细胞凋亡
        （十） 双荧光素酶检测
        （十一）数据处理与统计学分析
    三、 实验结果
        （一） 低氧对体外培养 NSCs 中 miR-210 表达的影响
        （二） DNA 甲基化对 miR-210 表达的调控
        （三） MiR-210 对神经干细胞存活的影响
        （四） MiR-210 对神经干细胞凋亡的影响
        （五） MiR-210 对神经干细胞增殖的影响
        （六） MiR-210 靶基因筛选
        （七） 低氧对 HIF-1 及其靶基因 BNIP3 表达的影响
        （八） MiR-210 与 BNIP3 相互作用靶位点的预测与验证
        （九） MiR-210 对 BNIP3 蛋白表达的影响
        （十） MiR-210 通过 BNIP3 调节低氧下 NSCs 存活
        （十一）MiR-210 抑制 AIF 入核
    四、 讨论
    五、 结论
第二部分 低氧对循环 miR-210 分泌的影响及其初步的功能研究
    一、 实验材料和试剂
        （一） 主要仪器设备
        （二） 实验动物
        （三） 主要试剂及常用配方
    二、 实验方法
        （一） Realtime-PCR 检测循环 miRNA 的表达
        （二） 免疫荧光
        （三） 细胞存活率分析
        （四） 超速离心分离囊泡
        （五） 数据处理与统计学分析
    三、 实验结果
        （一） 低氧促进神经干细胞分泌 miR-210
        （二） 检测培养上清中含有循环 miR-210 的囊泡
        （三） 循环 miR-210 对 NSCs 存活的影响
        （四） 低氧对大鼠脑脊液和血液中 miR-210 含量的影响
    四 讨论
    五 结论
参考文献
附录 Ⅰ. 攻读博士学位期间论文发表，专利申请以及获奖情况
综述
    参考文献
个人简历
致谢



本文编号：4049021