骨肉瘤中LRP1-SNRNP25融合基因促进肿瘤细胞侵袭迁移的分子机制

发布时间：2025-05-20 04:50

　　目的本研究旨在围绕前期研究中发现的存在于骨肉瘤的特异性新频发LRP1-SNRNP25融合基因,首先发现该融合基因在DNA水平上的结构和断裂位点,明确其形成机制,然后探讨LRP1-SNRNP25融合基因对骨肉瘤细胞的侵袭、迁移以及成瘤和远处转移能力的影响,之后寻找LRP1-SNRNP25融合基因下游的信号分子通路,明确LRP1-SNRNP25融合基因在骨肉瘤中发挥促侵袭和迁移作用的分子机制,为针对LRP1-SNRNP25融合基因的靶向治疗奠定基础,探索骨肉瘤中LRP1-SNRNP25靶向治疗新靶点。方法1.HiSeq X Ten平台对LRP1-SNRNP25融合基因阳性标本进行全基因组测序。针对已经检测到的LRP1-SNRNP25融合基因阳性的1例骨肉瘤样本,提取基因组DNA,采用HiSeq X Ten平台进行全基因组测序(WGS),结合生物信息学分析技术,明确LRP1-SNRNP25融合基因在DNA水平上的结构,并验证该融合基因的存在。2.探讨LRP1-SNRNP25融合基因过表达对骨肉瘤细胞的侵袭、迁移以及成瘤和远处转移能力影响。一方面,构建LRP1-SNRNP25质粒,购买LRP1和...

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、LRP1-SNRNP25 融合基因的发生机制、结构及其断裂位点
    1.1 对象和方法
        1.1.1 1例LRP1-SNRNP25 融合基因阳性的骨肉瘤组织标本
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
        1.1.4 主要的试剂配方
        1.1.5 实验方法
    1.2 结果
        1.2.1 琼脂糖凝胶电泳检测证明样本中DNA的完整性
        1.2.2 Hi SeqXTen全基因组测序在DNA水平上验证了LRP1-SNRNP25 的存在及其结构
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、构建LRP1-SNRNP25、LRP1、SNRNP25 稳定表达的骨肉瘤细胞系
    2.1 对象和方法
        2.1.1 细胞系和质粒
        2.1.2 主要试剂和耗材
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 实验用试剂的配制
        2.1.5 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 LRP1-SNRNP25 过表达质粒构建与鉴定
        2.2.2 Westernblot检测转染后骨肉瘤细胞143B和 SAOS2中LRP1、SNRNP25、LRP1-SNRNP25 的蛋白表达水平
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、LRP1-SNRNP25 融合基因对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响
    3.1 对象和方法
        3.1.1 稳转细胞株
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 主要试剂配方
        3.1.5 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 LRP1-SNRNP25 融合基因对骨肉瘤细胞迁移、侵袭能力的影响
    3.3 讨论
    3.4 小结
四、LRP1-SNRNP25 融合基因促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力的分子机制研究
    4.1 对象和方法
        4.1.1 细胞系
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器设备
        4.1.4 主要试剂的配制
        4.1.5 实验方法
    4.2 结果
        4.2.1 LRP1-SNRNP25融合基因上调p JNK和 MMP2 的表达水平
        4.2.2 在骨肉瘤细胞中LRP1-SNRNP25 融合蛋白与37LRP相互结合
        4.2.3 在骨肉瘤细胞中LRP1-SNRNP25 融合蛋白与p JNK、37LRP蛋白共定位
        4.2.4 LRP1-SNRNP25 融合蛋白与p JNK、37LRP蛋白相互作用
        4.2.5 针对37LRP的小干扰RNA降低LRP1-SNRNP25 上调的MMP2 表达水平
        4.2.6 pJNK抑制剂SP600125 抑制LRP1-SNRNP25 上调的37LRP/MMP2表达水平
        4.2.7 p JNK抑制剂SP600125 抑制LRP1-SNRNP25 增强的骨肉瘤细胞的侵袭和迁移作用
        4.2.8 针对37LRP的小干扰RNA抑制LRP1-SNRNP25 增强的骨肉瘤细胞的侵袭和迁移作用
        4.2.9 MMPs抑制剂Marimastat抑制LRP1-SNRNP25 增强的骨肉瘤细胞的侵袭和迁移作用
    4.3 讨论
    4.4 小结
五、在小鼠体内LRP1-SNRNP25 融合基因对增殖和转移的影响
    5.1 对象和方法
        5.1.1 实验对象
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 主要试剂配方
        5.1.4 实验方法
    5.2 结果
        5.2.1 在小鼠皮下骨肉瘤模型中LRP1-SNRNP25 融合基因促进肿瘤生长
        5.2.2 免疫组化实验检测LRP1-SNRNP25 高表达143B细胞和空载143B细胞种植的小鼠皮下骨肉瘤模型的瘤块中LRP1-SNRNP25,p-JNK,MMP2,ki67 的表达情况
        5.2.3 SP600125 可以抑制LRP1-SNRNP25 高表达143B细胞种植的小鼠皮下骨肉瘤模型的肿瘤生长
        5.2.4 在小鼠尾静脉转移模型中LRP1-SNRNP25 促进肿瘤的转移
    5.3 讨论
    5.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 低密度脂蛋白受体相关蛋白 1 在肿瘤中的作用研究
    参考文献
附件
致谢
个人简历



本文编号：4046876