肌肉组织中细胞亚群的构成解析及其在肌肉再生中的作用

发布时间：2025-06-29 18:51

　　骨骼肌占成年动物体重的40%～50%,是人体关键的发动器官,是肌肉骨骼系统不可缺少的组成部分。骨骼肌具有较强的再生能力,肌肉干细胞在骨骼肌再生过程中起关键作用。肌肉干细胞又名肌肉卫星细胞(satellite cells,SCs)在成年个体肌肉中位于肌纤维细胞膜和基膜之间,处于静息态[1]。肌肉受损伤时SCs被激活进入细胞周期,快速分裂产生大量成肌祖细胞(myogenic progenitor cells,MPCs),MPCs分化形成新的肌管完成受损肌肉的修复[2]。应对轻微损伤(如肌肉拉伤,利器割伤等)肌肉干细胞在微环境(坏死肌纤维,胞外基质、间质细胞及生长因子等成分构成)调控下可以完成修复,然而在肌肉严重缺损(如手术切除)即肌肉大体积缺失(volumetric muscle loss,VML)时却不能完成修复,以致形成大量的疤痕组织[3-8]。目前临床对VML的传统治疗手段为自体移植和异体移植,这种方法不仅受免疫排斥和有限供体的限制且移植后受损肌肉几乎不能恢复到损伤前水平[9-11]。因此寻找新VML治疗手段及解析骨骼肌再生修复机制迫在眉睫。组织工程是一种单独或组合运用种子细胞、支架材...

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词
绪论
1 第一章 MPCs与骨骼肌ECM相互作用初步探究
    1.1 引言
    1.2 实验试剂与仪器
        1.2.1 材料和试剂
        1.2.2 实验仪器及材料
        1.2.3 实验动物
        1.2.4 试剂配制
    1.3 实验方法
        1.3.1 成肌祖细胞的分离
        1.3.2 脱细胞基质制备
        1.3.3 H&E染色
        1.3.4 免疫荧光
        1.3.5 考马斯亮蓝染色(每步操作都在摇床上进行)
        1.3.6 细胞冻存(除MPCs细胞外)
        1.3.7 成肌祖细胞(MPCs)细胞冻存
        1.3.8 细胞复苏
        1.3.9 荧光实时定量PCR (Real time PCR)
        1.3.10 蛋白印迹
        1.3.11 扫描电镜样品制备方法:
        1.3.12 统计学分析
    1.4 实验结果
        1.4.1 成肌祖细胞(myogenic progenitor cells,MPCs)分离
        1.4.2 MPCs纯化
        1.4.3 MPCs鉴定及纯度统计
        1.4.4 MPCs分化成肌能力检测
        1.4.5 骨骼肌脱细胞支架的制备
        1.4.6 骨骼肌脱细胞支架表征
        1.4.7 骨骼肌脱细胞支架生物相容性
        1.4.8 MPCs能够在骨骼肌脱细胞基质上成肌分化
        1.4.9 构建组织工程肌肉束
    1.5 讨论
2 第二章小鼠骨骼肌快速贴壁细胞在成肌过程中的作用
    2.1 引言
    2.2 实验试剂和仪器
        2.2.1 材料和试剂
        2.2.2 实验仪器及材料
        2.2.3 实验动物
        2.2.4 试剂配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 成肌祖细胞的分离(同第一章)
        2.3.2 免疫荧光(同第一章)
        2.3.3 成肌祖细胞(MPCs)细胞冻存(同第一章)
        2.3.4 细胞复苏(同第一章)
        2.3.5 RNA提取(同第一章)
        2.3.6 RACs与MPCs 3D共培养
        2.3.7 Moveheat检测骨骼肌类器官生理功能的原理
        2.3.8 透射电镜样本制备
        2.3.9 统计学分析(同第一章)
    2.4 实验结果
        2.4.1 构建骨骼肌类器官
        2.4.2 RACs能够促进MPCs成肌
    2.5 讨论
3 第三章 基于单细胞转录组测序技术解析小鼠骨骼成肌过程中的细胞亚群及细胞间的联系
    3.1 引言
    3.2 实验试剂与仪器
        3.2.1 材料和试剂
        3.2.2 实验仪器及材料
        3.2.3 实验动物
        3.2.4 试剂配制
    3.3 实验方法
        3.3.0 从6-8w雄性C57小鼠肌肉中的离RACs和SACs(同第一章)
        3.3.1 单细胞转录组文库构建
        3.3.2 细胞爬片免疫荧光
        3.3.3 细胞冻存(除MPCs细胞外)
        3.3.4 成肌祖细胞(MPCs)细胞冻存(同第二章)
        3.3.5 细胞复苏(同第一章)
        3.3.6 RNA提取(同第一章)
        3.3.7 将RNA逆转录成cDNA(同第一章)
        3.3.8 透射电镜样本制备(同第二章)
        3.3.9 统计学分析(同第一章)。
    3.4 实验结果
        3.4.1 单细胞转录组测序解析RACs细胞亚型。
        3.4.2 RACs异质性分析
        3.4.3 RACs与MPCs相互作用潜在关系计算
        3.4.4 RACs与MPCs配体-受体相互作用的GO (Gene Ontology)分析
        3.4.5 RACs对MPCs成肌的促进作用
    3.5 讨论
4 总结
参考文献
综述
    参考文献
作者简历



本文编号：4054675