木香花抗黑斑病基因RbRdr1的克隆及表达分析

发布时间：2025-07-07 01:51

　　月季黑斑病是月季露地栽培的第一大病害。是世界性的病害,发生普遍且严重,较难防治,其病原菌为蔷薇盘二孢(Marssoninarosae)。伴随着月季定向选育工作的开展,其病原菌易产生各类生理小种,导致月季的抗病性逐渐变弱;目前,喷施化学药剂的方法可以用来预防和抑制病原菌的产生,但化学药剂的大量使用不仅增加了生产成本,还会导致生态环境的恶化。分子生物学的深入发展,使得从植物本身去寻找抗逆性变为可能。木香花为优质的野生资源,是高抗黑斑病种。本研究以木香花为研究对象,采用TA克隆法和RACE技术,获得抗黑斑病基因RbRdr1全长序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR法对该基因在木香花的不同组织部位,以及木香花成熟叶片受黑斑病菌侵染不同时期的时空表达进行分析。主要研究结果如下:1.克隆获得1个全长基因,为3462bp。其包含了 1个33bp的5'-UTR,1个3396bp的ORF,1 个33bp的3'-UTR,将其命名为RbRdr1 GenBank注册号MK584935。2.该基因的亚细胞定位于线粒体及过氧化物酶体,不具有信号肽及跨膜结构域,a-螺旋及无规卷曲为主要二级结构。氨基酸...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩列词表
第一章 研究背景
    1 月季简介
    2 月季黑斑病概述
        2.1 发病症状及危害
        2.2 黑斑病菌的分类
        2.3 黑斑病菌的形态
        2.4 发病原因及发病规律
            2.4.1 发病原因
            2.4.2 发病规律
        2.5 月季黑斑病的致病概述
    3 月季品种的抗性
        3.1 月季抗黑斑病的超微结构
        3.2 黑斑病的生理生化机制
        3.3 抗性遗传
    4 月季抗黑斑病的分子水平研究
        4.1 抗黑斑病基因Rdr1的概述
        4.2 月季遗传图谱构建
    5 本研究的目的意义及技术路线
        5.1 目的及意义
        5.2 技术路线
第二章 木香花抗黑斑病基因RbRdr1全长克隆
    1 实验材料
        1.1 植物材料
        1.2 主要仪器与试剂
        1.3 培养基
        1.4 引物序列
    2 实验方法
        2.1 木香花总RNA的提取
        2.2 总RNA完整性、浓度及纯度检测
        2.3 cDNA第一条链的合成
        2.4 目的片段PCR克隆
        2.5 目的片段琼脂糖凝胶回收及纯化
        2.6 连接与转化
    3 结果与分析
        3.1 总RNA的提取
        3.2 木香花抗黑斑病基因cDNA全长的获得
第三章 木香花RbRdr1基因序列的生物信息学分析
    1 材料与方法
        1.1 数据来源
        1.2 RbRdr1蛋白的结构特征分析
        1.3 系统进行分析
    2 结果与分析
        2.1 RbRdr1蛋白的理化性质
        2.2 RbRdr1蛋白的信号肽、亚细胞定位及跨膜分析
        2.3 RbRdr1蛋白的二级结构及三级结构预测
        2.4 系统进化分析
    3 讨论
第四章 木香花RbRdr1基因的时空表达分析
    1 实验材料
        1.1 植物材料
        1.2 引物序列
        1.3 主要仪器与试剂
    2 实验方法
        2.1 木香花成熟叶电镜扫描
        2.2 总RNA的提取
        2.3 cDNA的反转录
        2.4 RbRdr1基因qRT-PCR表达分析
    3 结果与分析
        3.1 木香花成熟叶扫描分析
        3.2 引物特异性扩增分析
        3.3 RbRdr1在木香花不同组织部位的表达分析
        3.4 抗黑斑病候选基因RbRdr1的qRT-PCR表达分析
    4 讨论
第五章 结论及后续工作建议
    1 主要研究结果
    2 后续工作建议
参考文献
附图
攻读硕士学位期间完成的科研成果及获奖情况
致谢



本文编号：4056300