LncRNA Peln1调控干细胞多能性退出的作用及机制研究

发布时间：2025-06-28 03:18

　　研究背景及目的:干细胞研究是目前生物医学研究的前沿领域,有着广阔的应用前景,诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)因可由体细胞重编程获得,回避了胚胎多能干细胞(embryonic stem cells,ESCs)应用时的伦理争议,因此应用前景更广。如何提高iPSCs诱导效率以及精确调控细胞定向分化问题是该项技术推广和应用的瓶颈。越来越多的证据表明长链非编码RN A(1 n cRN A)在细胞命运决定及体细胞重编程方面发挥了重要的调控作用,但具体哪些lncRNA,以何种方式在iPSCs诱导及定向分化过程中行使功能,需要我们更深入的研究和探索。为寻找具有多能性潜能的lncRNA,本研究综合了多个测序结果筛选出一条全新的与多能基因Oct4启动子结合,与多能性退出相关的lncRNA,并将其命名为 Pluripotency exit-associated lncRNA 1,简称 Peln1。发现Pelnl在重编程中呈差异表达,将Pelnl敲除可提高重编程效率;若将Pelnl过表达,则无法维持iPSCs的干性,细胞发生分化。提示Pelnl可能在干细...

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１染色质内环结构是诱导ｉＰＳＣｓ的重要瓶颈

ｏｍａｌ?＾?＂内一丄々遍加７祕也??了“启动子－增强子染色??Ｏｆｆｌｔｅ?＾?＾?＾?质内环结构”并最终重??编程形成ｉＰＳＣ，而９９％??Ｉ?＇ｌＯＣｉ?．，■?１＃４；〇ｓｍｃｉ?未编程细胞（ＵＲＣｓ），即??］ｔ?＊?．．．?使表达ＯＳＫＭ，也由于??呔ｔ－？?１?？？....

图１．２多能退出相关ｌｎｃＲＮＡＰｅ知ｉ的差异表达：在小鼠ｉＰＳＣｓ诱导过程中收??集成纤维细胞（Ｆｉｂ）、ＵＲＣ?（携带ＯＳＫＭ因子但未编程的细胞）和ｉＰＳＣｓ，以??

ｏｍａｌ?＾?＂内一丄々遍加７祕也??了“启动子－增强子染色??Ｏｆｆｌｔｅ?＾?＾?＾?质内环结构”并最终重??编程形成ｉＰＳＣ，而９９％??Ｉ?＇ｌＯＣｉ?．，■?１＃４；〇ｓｍｃｉ?未编程细胞（ＵＲＣｓ），即??］ｔ?＊?．．．?使表达ＯＳＫＭ，也由于??呔ｔ－？?１?？？....

图１．３?ＲＡＴ－ｓｅｑ测序结果提示ＩｎｃＲＮＡ?Ｐｅ／ｎｉ结合于小鼠多能因子０ｃ／．■／的??’

ｃＷ．启动子与增强子间染色质内??环形成而影响ｉＰＳＣｓ多能性的形成，对重编程及ｉＰＳＣｓ多能性退出可能起到关??键作用。??Ｏｃｔ４?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｏｆ?Ｐｅｌｎｌ??０ｃｔ４?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?３＇ｅｎｈａｎｃｅｒ??５?ｅｎｈａｎｃｅｒ?，??〇?■?■?■?■??Ｓ?ｋ....

图３．１?ＲＡＴ－Ｓｅｑ原理示意图??

ＤＮＡ文庳进行测序：利甩ＮＥＢＮｅｘｔ?ＣｈＩＰ－Ｓｅｑ?Ｌｉｂｒａｒｙ试剂盒将所??樽的ＤＮＡ样品进行ＤＮＡ文库的建立，文库建立成功后进行验证ＤＮＡ片段大??小，制得箱合铡序条件的ＤＮＡ样本送测序公司进行测序，鉴定整个裹因组中??与Ｐｅｌｎｌ?ＩｎｃＲＮＡ发生连接的靶点ＤＮＡ。....

本文编号：4054341