纳米磁珠介导牡丹花粉转基因技术的研究

发布时间：2025-07-02 03:46

　　牡丹(Paeonia Sect.Moutan)遗传背景复杂,通过杂交育种培育一个新品种至少需要10余年时间,包括转基因育种在内的分子育种将成为牡丹遗传改良的主要发展方向。然而,牡丹组织离体再生困难,至今尚未建立成熟的遗传转化技术体系。因此,探索一种简单、快速、有效的遗传转化新方法对牡丹育种具有重要意义。本研究采用四氧化三铁纳米磁珠转化方法,首次进行了花粉介导牡丹转基因的研究,选用磁性纳米颗粒(Magnetic nanoparticles,MNPs)poly MAG100为基因载体,构建不同质量比的纳米载体-基因复合物;通过琼脂糖凝胶电泳阻滞试验分析poly MAG100与DNA的结合能力以及保护DNA免受消化酶降解的能力;利用MNPs吸附质粒DNA,在磁场的作用下,将FT-EPSPS目的基因导入花粉,通过离体培养研究磁转染处理对花粉活力的影响;研究牡丹三个杂交组合FI代植株对草甘膦盐溶液的敏感性,及对潮霉素溶液的抗性,探究得出适宜牡丹的筛选体系;对初步筛选出的抗性种苗进行外源基因分子检测,分析其在牡丹基因组中的整合情况。所得结论如下:1 poly MAG100与DNA的质量比为1:1-1...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1草甘膦的作用机理

5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)在磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和莽草酸-3-磷酸(S3P)反应合成5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸(EPSP)的过程中起到催化剂的作用,而草甘膦的空间结构与磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)较为相似,并且两者与5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3....

图1-2研究技术路线

综上所述,本研究的技术路线可以总结为图1-2。2.1试验材料

图2-1 PCAMBIA 1301图谱

引物由TaKaRa公司合成。2.2试验方法

图2-2 pCAMBIA1301-FT菌液PCR

挑选出阳性单菌落扩摇后,进行菌液PCR扩增反应,扩增长度约为970bp,经琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明:条带与预期大小相符(图2-2),初步表明该克隆即为阳性克隆。2.3.2pCAMBIA1301-FT产物的鉴定

本文编号：4055182