重离子束辐照恩拉霉素菌株的选育研究

发布时间：2025-07-02 05:20

　　恩拉霉素作为一种新型商业抗菌剂,由于其具有热稳定、不易产生交叉耐药性、低残留、对大多数革兰氏阳性菌的强大杀菌作用以及促进动物生长等独特的优点,广泛应用于国内外的畜禽养殖业中。目前恩拉霉素主要由杀真菌素链霉菌（Streptomyces fungicidicus）进行液体有氧发酵生产,然而仍存在恩拉霉素菌株生产水平低、发酵成本高、恩拉霉素生物合成途径和代谢调节机制了解不充分等问题。因此,本论文首次以重离子束辐照作为微生物诱变手段获得大量S.fungicidicus突变体,通过多重筛选得到恩拉霉素高产菌株,并进一步对发酵工艺优化和发酵过程调控方面进行了研究。此外,利用基因组学手段分析了突变菌株的变异位点及相关高产机制。具体研究结果如下:（1）选择能量为80MeV/u,LET为40keV/μm的重离子束对恩拉霉素产生菌SG-01进行不同剂量的辐照处理。通过平板计数法统计菌株的致死率,确定菌株致死率与辐照剂量两者之间呈现良好的线性关系。利用琼脂块筛选和摇瓶筛选得到了三株高产恩拉霉素菌株M13、M30和M34,并且三株突变菌株连续5代产恩拉霉素能力比较稳定。M13、M30和M34具有显著增强的恩拉霉...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1恩拉霉素分子结构图式

20世纪60年代,日本武田药品工业株式会社的研究人员对兵库县西宫市的土壤微生物进行分析时发现一株杀真菌素链霉菌StreptomycesfungicidicusNO.B5477。恩拉霉素是从该菌株的发酵液和菌丝体中分离提取得到的一种环状多肽类抗生素,又可称为安来霉素、恩霉素、持....

图1.2恩拉霉素的作用机制

由于化学结构中含有氯元素,恩拉霉素还属于一种天然卤化物,与目前发现的含卤素抗生素例如万古霉素、氯霉素等一样都具有强大的生物活性,它能够在需氧和厌氧条件下抑制和杀死大部分革兰氏阳性菌如链球菌、金黄色葡萄球菌、梭状芽孢杆菌、肺炎双球菌等,抑菌浓度(Minimuminhibitory....

图5.1添加维生素C后恩拉霉素含量的变化趋势。**p<0.01,*p<0.05 vs Control

为了进一步考察维生素C对M30生长和恩拉霉素合成的影响,对发酵过程中不同时间点的发酵参数进行测定,结果如图5.1所示。与对照组相比,通过第4天补加维生素C,实验组后期恩拉霉素合成速率加快,在发酵至第10天时达到了1.03g/L。因此,确定维生素C的最适添加时间和浓度分别为发酵第....

图5.2维生素C对抗氧化关键酶和总抗氧化能力的影响。(A)M30蛋白浓度;(B)SOD;(C)CAT;(D)T-AOC。**p<0.01,*p<0.05 vs Control

细胞在氧化应激条件下响应的抗氧化保护机制主要分别两种,一种是抗氧化剂直接清除活性氧,另一种方式比较复杂,是间接通过中介来影响抗氧化酶的表达(Dinkova-Kostova和Talalay,2008;Halliwell等.,2007)。为了进一步探索维生素C对M30生长和恩拉霉素合....

本文编号：4055298