PEDF和VIP对小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎的治疗作用及机制研究

发布时间：2025-05-29 00:03

　　目的:单纯疱疹病毒性角膜炎（herpes simplex keratitis,HSK）是由I型单纯疱疹病毒（herpes simplex virus,HSV-1）感染引起的严重致盲性眼病,是当今世界患病率最高的感染性角膜疾病。在美国每年约有59万新发病例,近年的发病率约为11.8/10～5;在我国人群中HSK的患病率约为11/10～4。HSK主要表现为角膜神经退行、新生血管、炎症反应等,可导致角膜瘢痕化甚至失明,最终需要角膜移植手术才能重获光明。目前HSK的治疗主要依赖于核苷类似物抗病毒药物,例如更昔洛韦和阿昔洛韦等,缺乏有效缓解角膜症状的药物。色素上皮细胞衍生因子（pigment epithelium derived factor,PEDF）具有神经营养作用,还具有很强的抑制血管形成作用,已在脉络膜新生血管形成及糖尿病相关眼病等方面得到证实。血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）是神经元分泌的可与免疫系统双向沟通的内源宿主防御蛋白,能够参与调节炎症反应。然而两者在HSK中的表达及作用尚无研究报道,具有广阔的研究前景。本研究通过构建小鼠HSK模...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1 小鼠HSK模型各时间点角膜临床症状及神经退行、血管新生情况

为了评价HSV-1感染后角膜新生血管的变化,使用CD31抗体对角膜血管进行免疫荧光染色。全角膜血管免疫荧光染色结果显示,感染第3天可见角膜缘新生血管芽生成,第7天可见大量新生血管向角膜中央生长,15天时新生血管逐渐萎缩消退,至45天可见新生血管基本退行消失(图1C)。新生血管面积....

图2 空斑试验检测HSV-1病毒感染后各时间点角膜病毒载量

为评价小鼠HSK模型各时间点病毒含量的变化,我们取病毒感染后3、7、15、45天,应用空斑试验进行病毒定量分析,结果显示,HSV-1感染后第3天病毒量最高,大约为40pfu/ml,第7天、15天、45天病毒量显著下降,且肉眼不能辨别空斑,均不能达到检出标准(图2)。5小鼠HS....

图4 HSV-1病毒感染后小鼠角膜VIP表达变化

为观察VIP在小鼠HSK模型角膜中的表达,取正常角膜和HSV-1感染后第3、7、15、45天小鼠角膜进行相关检测。冰冻切片VIP免疫荧光染色结果显示,正常角膜中VIP仅有少量表达,病毒感染后第3天荧光显著增强,第7天荧光减弱,第15天荧光再次增强,第45天降至接近正常水平(图4A....

图5 外源性PEDF对小鼠HSK的治疗作用

为了探讨PEDF对免疫应答和促炎因子表达的影响,收取正常角膜、PBS对照组和PEDF处理组的HSK小鼠角膜,进行免疫荧光染色、流式细胞术和ELISA检测分析PEDF对角膜的影响。PEDF对角膜免疫应答的影响在病程第7天较第3天更明显,因此选取第7天角膜作为研究对象。免疫荧光染色结....

本文编号：4048410