雷帕霉素诱导牛成纤维细胞发生自噬改善细胞老化状态的研究

发布时间：2025-05-29 03:38

　　细胞培养过程中细胞老化是一个不可避免的现象。延缓细胞老化过程,提高细胞传代过程中的活力,对于永生化细胞获得,干细胞传代以及转基因阳性细胞的筛选具有重要意义。自噬是细胞内自我修复的机制之一,保持细胞代谢的均衡,并参与细胞老化等细胞生长发育的过程。研究证明自噬在延缓细胞老化方面起重要作用。在老化进程中自噬水平下降,且自噬下降会加速老化进程,同时自噬水平升高可以延缓老化的速度。改善自噬水平延缓细胞老化已成为一个热点科学问题,受到各国科学者们的重视,对细胞遗传资源保护以及改善与老化相关疾病都具有重要意义。雷帕霉素是一种免疫抑制剂,可以抑制mTOR,诱导和促进细胞自噬的发生。本研究利用雷帕霉素处理成年牛皮肤成纤维细胞,旨在通过促进细胞自噬,改善成体成纤维细胞老化的现象,延长细胞寿命,以期保护其遗传资源,同时也为核移植等提供理想的生物学材料。本研究对于传代到第13代发生老化的成年牛成纤维细胞用雷帕霉素(RAPA)进行处理。检测与细胞老化有关基因CDKN2A、CDKN1A的表达以及β-半乳糖苷酶(β-gal)的活性,观察了细胞内自噬小体形态的变化,并通过转染pEX-GFP-hLC3 WT质粒观察细胞中...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1:细胞自噬的形成过程

自噬过程的发生经历了四个阶段,自噬泡的初始产生、自噬体的形成、自噬的转运融合、自噬的降解(Jinetal.2014)。自噬泡的形成:在外界刺激因子作用下,在细胞内受损的线粒体等物质周围有杯状形的双层膜结构初步形成。自噬体的形成:自噬过程始于细胞质成分的隔离,其中细胞质的某些部....

图1-2:雷帕霉素的化学结构

雷帕霉素的化学分子式为C51H79NO13,分子量914.172g/mol,熔点为183-185℃,为白色固体结晶,亲脂性,溶解于有机溶剂,极微溶于水,几乎不溶于乙醚。1.4.2雷帕霉素作用机制

图1-3:细胞mTOR信号通路

现已被科学家发现,雷帕霉素能诱导细胞发生自噬作用(吴伯艳等2015)11。研究表明,雷帕霉素能在体内和体外通过抑制靶蛋白(mTOR)激酶的活性从而激活细胞自噬(Graziottoetal.2012;Garrattetal.2016)。雷帕霉素与FK506结合蛋白12形成复....

图2-1 P1与P14成纤维细胞的生长曲线

第一代的牛皮肤成纤维细胞和第14代的成纤维细胞的生长趋势均符合细胞体外生长的一般规律,都为S形曲线。第1-3天为潜伏期,细胞生长缓慢;第3-5天为对数生长期,细胞生长迅速,数量明显增多;5天之后细胞进入平台期,基本不再生长。绘制两组细胞的生长曲线,结果显示,与P1细胞相比,P14....

本文编号：4048666